昆蟲細胞蛋白表達服務

桿狀病毒表達載體系統(baculovirus expression vector system,BEVS)是當今基因工程四大表達系統之一。BEVS屬于真核表達系統,通過BEVS得到的重組病毒易于篩選、具有翻譯后修飾功能、表達外源基因的效率較高。BEVS還可以同時表達多個外源基因,在分泌蛋白生物活性的同時增加產量。因此,BEVS在科研和工業生產中通常應用于大規模重組蛋白的制備。

實驗流程

昆蟲細胞蛋白表達服務流程圖

實驗步驟 實驗內容
密碼子優化及基因合成 分析基因序列,優化密碼子,合成目的基因,提供載體
重組質粒構建 構建含有目的基因的載體質粒
重組桿狀病毒載體構建 將目的基因亞克隆到合適的桿狀病毒轉移載體上
重組桿狀病毒擴大培養 轉染昆蟲細胞,制備病毒貯液,空斑實驗測定病毒滴度
表達條件優化 檢測并優化表達條件(細胞株、MOI、時間溫度等)
大規模桿狀病毒昆蟲細胞培養 根據優化條件,可提供大規模細胞培養
蛋白分析和純化 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
通過親和層析,離子交換,疏水及凝膠過濾等方法純化表達的重組蛋白。
去除不需要的純化標簽。

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